goryochemical通過許可和內部增值創造創新熒光探針，方法是擴大細胞生物學的應用，并方便地將其帶給學術界、小型生物技術公司和大型制藥公司的研究人員。

在invitro和invivo與生命科學儀器公司建立了*的合作關系。

實驗階段創造了理解假設驅動和發現研究的解決方案。與光學探針相關的堅實的化學背景，通過與東京大學(長野教授和烏拉諾教授)和北海道大學(諾貝爾獎獲得者鈴木教授)的關系，使高陽成為連接invitro和invivo以及人類翻譯的熒光試劑的主要供應商。

在臨床試驗中，我們還開發了新的熒光探針，可以在日本的臨床前和臨床試驗中用于熒光圖像引導手術檢測癌癥。

在不久的將來，我們將為患者提供熒光圖像引導手術的新方法。

goryochemical GC301說明書

AcidiFluor™ ORANGE

酸性熒光橙色

活細胞酸性細胞器的熒光探針(試驗尺寸)

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• 高信噪比
• 橙色熒光，可用于多色成像
• *的光穩定性

acid Fluor ORANGE是一種熒光成像探針，可在酸性環境中顯著增強熒光。該探針能選擇性地染色溶酶體、晚期內體和顆粒等酸性細胞器。其優異的選擇性能夠檢測酸性環境。即，在pH5.0的條件下，與酸性細胞器的環境相同，熒光強度是物理pH 7.4的50倍或更多。acid Fluor ORANGE對照射激發光表現出很強的光穩定性。由于它通過在532納米或514納米激發發出橙色熒光，多色成像通過與藍色熒光(CFP、赫希斯特等)結合成為可能。)，綠色熒光(綠色熒光蛋白、熒光素等。)和近紅外熒光。acid Fluor ORANGE可用于檢測酸性細胞器、觀察顆粒釋放、胞吞/胞吐成像等。

酸性熒光橙的特點

λabs 535 nm
λfl 560 nm

pKa 5.1

高信噪比

圖1。酸熒光橙的熒光光譜與酸堿度的關系

酸性熒光橙的熒光光譜分別在pH 5.0或pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中測定。pH 5.0緩沖液對應于酸性細胞器中的條件，pH 7.4對應于生理細胞質條件。酸性熒光橙在pH 5.0時的熒光強度比pH 7.4緩沖液中的熒光強度提高了50倍。(λex 532 nm / λem 568 nm)

發出橙色熒光，可用于多色成像

圖2使用HeLa細胞的多色成像的例子

用酸性熒光橙和Hoechst33342對表達線粒體-綠色熒光蛋白的HeLa細胞進行多重染色。溶酶體用酸性熒光橙色染色，細胞核用Hoechst33342染色為藍色，線粒體用綠色熒光蛋白染色為綠色。如圖2所示，酸性熒光橙色可用于多色成像

*的光穩定性

圖3通過光浸試驗與競爭對手產品的比較

樣品被連續照射180秒，并在共焦顯微鏡下觀察。盡管溶血跟蹤器綠色DND-26和溶血跟蹤器紅色DND-99顯著變色，但酸性熒光橙色的熒光仍然存在。溶血傳感器綠色DND-189不適合連續觀察，因為熒光通過激發光照射泄漏到細胞質中。
高陽化學公司在廣瀨賢三教授(東京大學神經生物學系醫學研究生院教授)的指導下，將酸性熒光橙商業化。酸性熒光橙獲得東京大學的許可。該產品的開發得到日本科學技術署(JST)項目“測量和分析系統和技術的開發”的支持。

酸性熒光橙問答

我能用于固定樣品嗎？

不。不幸的是，酸性熒光橙色不能用于固定樣品。據推測，酸性熒光橙在固定樣品中可能不發熒光，因為酸性環境不能通過固定作用保持在酸性細胞器中。酸性細胞器中的酸性環境似乎只有在細胞存活時，才能利用三磷酸腺苷作為能源。

什么樣的成像是可能的？

酸性熒光橙可用于溶酶體成像、RBL-2H3脫顆粒成像(如應用筆記所示)和使用中性粒細胞或胰島素瘤的胞吐成像等。一旦我們準備好，這些應用程序將在應用筆記中發布。

除了pH 7.4和pH 5.0外，熒光光譜如何？

在pH 3.0-pH8.0緩沖溶液中測得的酸性熒光橙色的熒光強度光譜如下所示。酸堿值變得越小，熒光發射的強度增加。

關于細胞內轉運的研究:酸性熒光橙色能標記抗體或蛋白質嗎？

使用酸性熒光橙-NHS(GC302)可以使蛋白質進入酸性細胞器時發出熒光。

熒光強度在小于3的酸堿度下波動嗎？

酸性熒光橙的強度在小于3的酸堿度下波動不大。

酸性熒光橙-NHS問答

標簽產量是如何確定的？

標記產率可以通過使用以下公式來確定。用酸性熒光橙-NHS的濃度除以目標蛋白的濃度，可以估算出與目標蛋白分子結合的酸性熒光橙分子的數量。

A544,280:標記蛋白在544納米或280納米的吸光度

CF:校正系數(0.12)

e酸性熒光橙-NHS:酸性熒光橙-NHS的摩爾吸光系數(80，000)

e蛋白質:目標蛋白質的摩爾吸光系數(例如IgG為216，000)

有效標記目標蛋白的宜方法是什么？

我們建議使用純化的抗體或蛋白質。如果您想標記蛋白質混合物，請通過超濾或凝膠過濾去除污染物質。尤其是胺的污染(例如。Tris)導致標記效率降低。

值得注意的是，如果過量的染料結合到目標蛋白上(每個蛋白分子7-8個分子)，就會導致熒光信號飽和或目標蛋白變性。

酸性熒光橙色染料可用于固定細胞成像嗎？

很抱歉，酸化熒光橙色-NHS僅用于“活”細胞成像。這是因為囊泡中的酸性環境被固定過程破壞了。

CaSiR-1/CaSiR-1AM的問答

什么是調幅酯？

氨基甲烷代表乙酰氧基甲基，氨基甲烷酯由羧酸衍生而來，以增加質膜的滲透性。如下圖所示，CaSiR-1AM滲透細胞膜，其乙酰氧基甲基被細胞內酯酶裂解，形成能與鈣相互作用的CaSiR-1結構2+。當乙酰氧基甲基被裂解產生CaSiR-1時，水溶性顯著增加，這變得難以泄漏胞外液體。

CaSiR-1/CaSiR-1調幅對其他陽離子有響應嗎？

卡西爾-1和卡西爾-1調幅在高達1毫米毫克的情況下幾乎沒有發射2+或者高達100毫米納+或者國王+。

當我用卡西爾-1上午給細胞染色時，有必要添加普朗尼克F-127(清潔劑)嗎？

不僅卡西爾-1調幅，而且所有調幅酯探針都具有*的親脂性。因此，在調幅酯溶解在二甲基亞砜中，然后直接分散在緩沖溶液中的情況下，它們聚集并變得難以進入細胞。因此，有必要通過添加去污劑和在某些情況下，另外對去污劑和氨基甲酸酯的溶液進行超聲處理來制備很好地結合到細胞中的染色溶液。

CaSiR-1/CaSiR-1調幅的細胞毒性如何

雖然我們還沒有進行細胞毒性試驗，但我們計劃比較我們的產品和競爭對手的產品的細胞毒性。我們一做實驗，就把結果上傳到惠普。此外，由于激發光毒性是小波長%3E長波長，與藍色、綠色或紅色鈣探針相比，近紅外探針CaSiR-1不會對細胞造成太大傷害。

POLARIC問答

為什么顏色會改變？

因為親和力不同。

POLARIC通過改變溶劑來改變顏色，我們稱之為溶劑變色。(左側圖片顯示。)

溶劑有一個叫做極性的指數。POLARIC熒光探針對溶劑的親和力受溶劑極性的影響，如類水或類油。這改變了溶解的POLARIC熒光探針，例如，藍色代表色拉油，綠色代表酒精，紅色代表水。因此，POLARIC熒光探針和溶劑之間的親和力差異可以表現為顏色的變化。

這一特性使我們能夠替代各種現象，如溫度變化、壓力變化、酸堿度變化和硬度變化等。POLARIC熒光探針的顏色變化。

圖1賈布朗斯基圖和溶劑重取向的模式圖

光吸收激發POLARIC熒光探針后，它們的激發狀態通過周圍溶劑的重新定向而穩定。

由于處于激發狀態的探針分子的電荷很大程度上是局部的，極性溶劑比非極性溶劑更有效地穩定激發狀態。穩定性的差異反映在熒光波長的差異上。

ET(30)每種溶劑的值如表所示。如圖2所示，當POLARIC溶解在每種溶劑中時，顏色從藍色(左側)變為黃色(右側)。這是因為當ET(30)當ET(30)價值大。

ET(30)每種溶劑的值

圖2溶解POLARIC的各種溶劑的紫外圖像照片