Lactadherin是一種分布廣泛的糖蛋白（?50 kDa），最初由于與乳脂/脂質(zhì)小球膜相關(guān)而被表征。同義詞是PAS-6 / 7，牛相關(guān)黏蛋白，BA-46，P47和MFG-E8。內(nèi)分泌粘附素的結(jié)構(gòu)特征是存在兩個(gè)表皮生長(zhǎng)因子（EGF）同源域（在第二個(gè)EGF域中具有RGD肽基序），以及兩個(gè)與凝集素域的盤(pán)狀蛋白家族具有同源性的C域，包括凝血因子V和VIII。乳桿菌粘附素以鈣非依賴性方式顯示優(yōu)先結(jié)合磷脂酰絲氨酸（L-形式），并且比膜聯(lián)蛋白V更特異性地結(jié)合。

純化的乳黏附素通過(guò)阻斷血液凝固蛋白的含磷脂酰絲氨酸的膜位點(diǎn)而起抗凝劑的作用（10）。熒光標(biāo)記的乳黏附素用作有核細(xì)胞和受刺激的血小板上暴露的磷脂酰絲氨酸的敏感探針（8、9）。乳粘附素將與磷脂酰絲氨酸含量低于膜聯(lián)蛋白V結(jié)合閾值的膜結(jié)合。

內(nèi)酯粘附素是從未經(jīng)巴氏消毒的牛乳中提純的（11）。

圖解應(yīng)用

上圖： K562細(xì)胞（上）和HL60細(xì)胞（下）在凋亡早期與FITC結(jié)合的乳黏附素（綠色）和Alexa-647結(jié)合的膜聯(lián)蛋白V（紅色）共同染色。膜聯(lián)蛋白被內(nèi)化在顆粒中，并且未檢測(cè)到染色細(xì)胞。參考：Shi，J.，Y. Shi，LN Waehrens，JT Rasmussen，CW Heegaard和GE Gilbert（2006）。“乳粘附素檢測(cè)到永生化白血病細(xì)胞經(jīng)歷程序性細(xì)胞死亡的早期磷脂酰絲氨酸暴露。” 細(xì)胞計(jì)數(shù)法A 69（12）：1193-201。版權(quán)所有2006。JohnWiley＆Sons，Inc.經(jīng)John Wiley＆Sons，Inc.許可轉(zhuǎn)載。

上圖：用星形孢菌素處理后2小時(shí)（上）和3小時(shí)（下），用FITC結(jié)合的乳黏附素染色的HeLa細(xì)胞。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞具有小囊泡和長(zhǎng)而細(xì)的附肢，可被乳黏附素染色。參考：Waehrens LN，Heeghaard，CW，Gilbert GE，Rasmussen JT。牛Lactadherin作為在凋亡HeLa細(xì)胞表面表達(dá)的磷脂酰絲氨酸的鈣獨(dú)立成像劑2009 J. Histochem。細(xì)胞化學(xué)。（2009年6月，ePub）。

以上：小鼠腸系膜靜脈血栓形成中的磷脂酰絲氨酸暴露。在即將腸系膜外在化之前，通過(guò)尾靜脈向小鼠分別給予1μg乳黏附素和膜聯(lián)蛋白V。腸系膜暴露于氯化鐵中，然后用鹽水/多聚甲醛灌注動(dòng)物。用抗血纖蛋白原/血纖蛋白（左），抗血小板（中）和用堿性磷酸酶Vector Red底物顯影的抗漆蛋白抗體（右）對(duì)腸系膜的連續(xù)部分進(jìn)行染色。一層纖維蛋白原/纖維蛋白（左，實(shí)心箭頭）覆蓋了壁畫(huà)出血（空心星）。血小板（中部）沿血栓的腔表面（空心三角形）散布，并在纖維蛋白原/纖維蛋白鏈延伸進(jìn)入內(nèi)腔時(shí)散布。乳腺粘附素染色（右）在升高的內(nèi)皮表面上*（實(shí)心箭頭），包括靠近壁的粘附血小板。纖維蛋白鏈上的血小板未檢測(cè)到染色（空心箭頭）。（Shi J，Piper SW，Rasmussen JT，Heegaard CW，Gilbert GE。乳桿菌粘附素在體內(nèi)阻斷血栓形成和止血：與血小板磷脂酰絲氨酸的暴露相關(guān)。JThrombHaemost。2008年7月； 6（7）：1167-1174）。

使用BLAC-FITC的準(zhǔn)則：

FITC偶聯(lián)的牛乳粘附素（BLAC-FITC）作為100X儲(chǔ)備溶液（1.6微摩爾）在20mM Tris，150mM NaCl，pH 7.4的緩沖液中提供，緩沖液中含1％（w / v）牛血清白蛋白和0.02％疊氮化納。假設(shè)大多數(shù)標(biāo)記反應(yīng)體積約為0.5ml，則一小瓶100X儲(chǔ)備材料足以進(jìn)行200次標(biāo)記反應(yīng)。  此外，由于該產(chǎn)品帶有熒光標(biāo)記，因此應(yīng)避光。

對(duì)于典型的細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)，通過(guò)離心收集凋亡細(xì)胞，然后重懸在生理緩沖液中，例如TBS（20mM Tris，150mM NaCl，pH 7.4），HBS（20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4）或PBS（4.3mM Na 2 HPO 4，1.47mM KH 2 PO 4，137毫米的NaCl，2.7mM的KCl，pH 7.4）中，以大約1×10的最終細(xì)胞計(jì)數(shù)6細(xì)胞/毫升?？梢酝ㄟ^(guò)胰蛋白酶消化收獲粘附細(xì)胞，但是在將最終懸浮液制成緩沖液之前，應(yīng)在培養(yǎng)基或緩沖液中至少洗滌一次。以每0.5ml細(xì)胞懸液5微升的速率將100X FITC共軛乳膠粘附原液添加到細(xì)胞懸液中。此時(shí)，可以通過(guò)添加PI至終濃度為0.5至1 µg / ml來(lái)開(kāi)始進(jìn)行碘化丙啶（PI）的可選染色。將反應(yīng)混合物在室溫下（避光）孵育5至10分鐘。

標(biāo)記的細(xì)胞可以通過(guò)多種方法進(jìn)行分析，包括流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡檢查?？梢允褂靡韵聶z測(cè)器設(shè)置監(jiān)視熒光檢測(cè)：

            BLAC-FITC：Ex = 488 nm；Em = 530海里

            PI：Ex = 488 nm；Em = 640納米